类鼻疽菌Ⅲ型分泌系统BipD蛋白的重组表达及其免疫学特性研究 - 南栋琪; 文远; 陈建高; 饶承龙; 吴潘; 张子元; 王施韦; 闫晶敏; 李倩; 毛旭虎 (陆军军医大学学报, 2024)
R341%R378.99%R392.11; 目的 重组表达类鼻疽菌Ⅲ型分泌系统BipD蛋白,制备多克隆抗体并鉴定其免疫学性质.方法 利用pET-28a表达系统在Eschericahia coli(E.coli)BL21(DE3)中重组表达BipD蛋白,通过His Trap亲和层析纯化获得rBipD蛋白,免疫BALB/c小鼠获得rBipD多克隆抗体;分别用兔抗类鼻疽菌血清和类鼻疽菌感染阳性患者血清进行Western blot实验检测rBipD的免疫反应性;通过Western blot及免疫荧光染色检测鉴定rBipD的免疫原性;以rBipD建立间接ELISA检测临床类鼻疽患者血清抗体.结果 成功构建pET-28a-BipD重组质粒并转化至E.coli BL21(DE3)中诱导表达、纯化获得了相对分子质量约为36×103的rBipD蛋白,纯度约为95.4％.rBipD蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性.免疫小鼠可产生特异性抗体,制备鼠抗rBipD多克隆抗体,效价达1∶512 000.5.0 μg/mL rBipD蛋白可与类鼻疽患者血清发生免疫反应,而不与结核患者血清发生免疫反应,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 成功制备了具有免疫学活性的rBipD蛋白及其多克隆抗体,为其用于临床免疫学诊断和类鼻疽菌感染免疫机制研究提供了良好的工具.