热刺激后小胶质细胞细胞外囊泡对神经元的损伤作用 - 李萍; 罗雪; 罗珍; 何根林; 王泽泽; 申婷婷; 刘晓倩; 谭雨龙; 杨学森 (陆军军医大学学报, 2024)
R338.1%R339.52%R363.21; 目的 探究热刺激后小胶质细胞细胞外囊泡对神经元损伤的影响.方法 热刺激BV2小胶质细胞后收集上清,通过不同的超速离心速度获取细胞外大囊泡和小囊泡.利用纳米粒度分析仪检测粒径,利用Western blot检测囊泡上TSG101、CD63和flotillin-1的表达.PKH67标记BV2来源的囊泡后与N2a细胞共孵育,检测神经元对小胶质细胞细胞外囊泡的摄取情况.分别将热刺激后BV2来源的大囊泡和小囊泡与N2a共孵育,通过CCK-8、细胞外乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、台盼蓝染色和TUNEL染色法评价热刺激后N2a的损伤情况.结果 小囊泡粒径介于30～120 nm,高表达TSG101和CD63,大囊泡粒径介于90～1000 nm,高表达flotillin-1;BV2来源的细胞外囊泡可被N2a细胞摄取并参与热刺激对N2a细胞损伤的调节,其中CCK-8检测结果表明小胶质细胞来源的大小囊泡均能降低热刺激后N2a细胞的活力(P<0.05).LDH检测、台盼蓝染色及TUNEL检测结果表明大囊泡(P<0.05)和小囊泡(P<0.01)均能显著提高热刺激后N2a细胞LDH的释放水平、N2a细胞的蓝染水平及凋亡程度,且小囊泡处理组中N2a细胞的LDH释放水平、蓝染和凋亡水平高于大囊泡处理组.结论 热刺激后小胶质细胞通过细胞外囊泡加剧了神经元的损伤.