清肾颗粒通过调控外泌体、miR-330-3p以及CREBBP表达抑制小鼠肾纤维化 - 戴荣; 曹泽平; 刘传娇; 葛永; 程梦; 王伟丽; 陈义珍; 张磊; 王亿平 (南方医科大学学报, 2024)
目的 探讨清肾颗粒对腺嘌呤诱导的肾纤维化小鼠模型及尿酸刺激下NRK-49F细胞的作用及其调控外泌体、miR-330-3p和CREBBP的机制.方法 动物实验:构建腺嘌呤诱导的肾纤维化小鼠模型,分为正常组、模型组和清肾颗粒组(8.0 g·kg-1·d-1),6只/组,灌胃12周.采用尾静脉注射腺相关病毒载体,实验结束后收集双侧肾组织.观察小鼠肾组织外泌体标记蛋白CD9,Hsp70,TSG101蛋白水平变化;Western blotting及免疫荧光检测小鼠肾组织Col-Ⅲ、α-SMA、FN和E-cad表达变化;HE和Masson染色观察小鼠肾组织病理学变化.细胞实验:构建尿酸刺激下的NRK-49F细胞模型(尿酸400 μmol/L,SD大鼠灌胃制备清肾颗粒含药血清用于细胞实验,分为正常组、模型组和清肾颗粒含药血清组.观察NRK-49F细胞中外泌体标记蛋白CD9,Hsp70,TSG101蛋白水平变化;Western blotting及免疫荧光检测NRK-49F细胞中Col-Ⅲ、α-SMA、FN和E-cad表达变化;双荧光素酶报告基因检测miR-330-3p与CREBBP靶向关系;RT-qPCR和Western blotting检测NRK-49F细胞中miR-330-3p与CREBBP表达变化.结果 动物实验中,Western blotting结果显示,与正常组相比,模型组CD9、Hsp70、TSG101蛋白水平升高(P<0.05);与模型组相比,清肾颗粒组CD9、Hsp70、TSG101蛋白水平降低(P<0.05).Western blotting及免疫荧光结果显示,与正常组相比,模型组Col-Ⅲ、α-SMA、FN表达增加,E-cad表达减少(P<0.05);与模型组相比,清肾颗粒组Col-Ⅲ、α-SMA、FN表达减少,E-cad表达增加(P<0.05).肾脏病理检查显示,清肾颗粒可以明显减轻小鼠肾组织纤维化(P<0.05).RT-qPCR结果显示,尾静脉注射腺相关病毒病毒载体抑制miR-330-3p表达,增加CREBBP水平,减轻肾纤维化(P<0.05).双荧光素酶报告基因结果显示,CREBBP是miR-330-3p的靶点(P<0.05).RT-qPCR和Western blotting结果显示,与正常组相比,模型组miR-330-3p表达增加,CREBBP表达减少(P<0.05);与模型组相比,清肾颗粒组miR-