海洋α-葡萄糖苷酶的克隆表达及其制备高纯潘糖的研究

TS201.3; 潘糖是含α-1,6糖苷键的低聚异麦芽糖,α-葡萄糖苷酶是制备潘糖的关键酶制剂.本研究对深海热液口超嗜热古菌(Thermococcus siculi HJ21)中的α-葡萄糖苷酶序列进行合成,并克隆入载体pET29a,在大肠杆菌BL21中表达,通过His Trap HP层析柱纯化获得纯酶,以SDS-PAGE电泳测定α-葡萄糖苷酶分子量,并研究了酶的性质和其转糖苷作用.结果表明:该基因为729 bp,编码242个氦基酸,分子量约为27.2 kDa.该酶最适催化温度和pH分别为40℃和6.0.在以果糖为受体,与麦芽糖的比例为1∶9,反应10h时,其潘糖的生成量最高可以达到79.1％...

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Published in食品工业科技 Vol. 45; no. 19; pp. 158 - 165
Main Authors 于轶群, 薛陆州, 倪豪, 蒋蕾, 亢新鑫, 盘赛昆, 王淑军
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 江苏省海洋生物资源与环境重点实验室,江苏海洋大学,江苏连云港 222005 01.10.2024
江苏省海洋生物技术重点实验室,江苏海洋大学,江苏连云港 222005
Subjects
低聚异麦芽糖
α-glucosidase
潘糖
iso-malto-oligosaccharide
转糖苷
cloning and expression
克隆表达
panose
α-葡萄糖苷酶
trans glycoside
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ISSN1002-0306
DOI10.13386/j.issn1002-0306.2023110185

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Summary:TS201.3; 潘糖是含α-1,6糖苷键的低聚异麦芽糖,α-葡萄糖苷酶是制备潘糖的关键酶制剂.本研究对深海热液口超嗜热古菌(Thermococcus siculi HJ21)中的α-葡萄糖苷酶序列进行合成,并克隆入载体pET29a,在大肠杆菌BL21中表达,通过His Trap HP层析柱纯化获得纯酶,以SDS-PAGE电泳测定α-葡萄糖苷酶分子量,并研究了酶的性质和其转糖苷作用.结果表明:该基因为729 bp,编码242个氦基酸,分子量约为27.2 kDa.该酶最适催化温度和pH分别为40℃和6.0.在以果糖为受体,与麦芽糖的比例为1∶9,反应10h时,其潘糖的生成量最高可以达到79.1％.研究结果为古细菌α-葡萄糖苷酶制备高纯度潘糖提供了依据.
ISSN:1002-0306
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2023110185