基于碳水化合物结合结构域的香菇多糖特异性荧光探针的构建与应用

TS219; 为构建得到香菇多糖特异性荧光探针以实现香菇多糖的原位可视化观察,本研究利用生物信息学技术从β-1,3-D-葡聚糖酶TlGluA中挖掘得到一个潜在具有香菇多糖结合能力的碳水化合物结合结构域,并对其进行了重组表达及分离纯化,重组蛋白命名为LBM,进一步利用微量滴定板法研究了 LBM的结合特异性.结果表明LBM能够结合香菇多糖,但未表现出对大麦β-葡聚糖、凝结多糖或魔芋葡甘露聚糖的结合能力,这证实该蛋白对香菇多糖具有良好的结合特异性.此外,通过将LBM与绿色荧光蛋白EmGFP融合表达构建得到首个香菇多糖特异性荧光探针,命名为EmGFP-LBM,基于该探针实现了香菇多糖在香菇中的原位可视...

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Published in食品工业科技 Vol. 45; no. 19; pp. 240 - 246
Main Authors 李静敏, 薛长湖, 梅轩玮, 刘冠辰, 韩瑾, 常耀光
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 中国海洋大学食品科学与工程学院,海洋食品加工与安全控制全国重点实验室,山东青岛 266000 01.10.2024
Subjects
碳水化合物结合结构域
荧光探针
in situ visualization
fluorescent probe
香菇多糖
原位可视化
carbohydrate-binding module
lentinan
香菇
Lentinula edodes
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ISSN1002-0306
DOI10.13386/j.issn1002-0306.2023100028

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Summary:TS219; 为构建得到香菇多糖特异性荧光探针以实现香菇多糖的原位可视化观察,本研究利用生物信息学技术从β-1,3-D-葡聚糖酶TlGluA中挖掘得到一个潜在具有香菇多糖结合能力的碳水化合物结合结构域,并对其进行了重组表达及分离纯化,重组蛋白命名为LBM,进一步利用微量滴定板法研究了 LBM的结合特异性.结果表明LBM能够结合香菇多糖,但未表现出对大麦β-葡聚糖、凝结多糖或魔芋葡甘露聚糖的结合能力,这证实该蛋白对香菇多糖具有良好的结合特异性.此外,通过将LBM与绿色荧光蛋白EmGFP融合表达构建得到首个香菇多糖特异性荧光探针,命名为EmGFP-LBM,基于该探针实现了香菇多糖在香菇中的原位可视化观察.研究发现,香菇多糖不仅存在于菌丝细胞壁中,还以散在状态分布于菌丝细胞间隙与细胞内部.本研究成功构建得到首个香菇多糖特异性荧光探针,为香菇多糖的原位可视化观察提供了关键工具.
ISSN:1002-0306
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2023100028