豆血红蛋白在酿酒酵母中的异源表达

Q786; 豆血红蛋白是一种植物源血红蛋白,在植物蛋白肉加工中可作为重要的风味催化剂和着色剂,大大增加植物蛋白肉的拟真性.为实现豆血红蛋白在食品级微生物中的异源表达,将携带豆血红蛋白LBC2基因的质粒PESC-TRP转入酿酒酵母CEN.PK2-1C中,通过添加kozak序列促进其翻译,并进一步对启动子序列进行选择,以提高豆血红蛋白表达量.对重组菌株进行发酵,用Western blot分析LegH蛋白表达水平.结果显示,诱导型启动子GAL1,10较三种组成型启动子TEF1、ADH1、GAP在表达LegH能力上具有显著优势,较产量最低的ADH1启动子提升了 3.93倍.在组成型启动子中,TEF1启...

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Published in食品工业科技 Vol. 44; no. 20; pp. 101 - 107
Main Authors 薛常鲁, 张鹏飞, 白丽君, 肖功年, 魏培莲
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 浙江科技学院生物与化学工程学院,浙江杭州 310023 01.10.2023
浙江省农产品化学与生物加工技术重点实验室,浙江杭州 310023
Subjects
promoter optimization
异源表达
启动子优化
leghemoglobin
豆血红蛋白
heterologous expression
酿酒酵母
蛋白质印迹
western blot
Saccharomyces cerevisiae
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ISSN1002-0306
DOI10.13386/j.issn1002-0306.2022120029

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Summary:Q786; 豆血红蛋白是一种植物源血红蛋白,在植物蛋白肉加工中可作为重要的风味催化剂和着色剂,大大增加植物蛋白肉的拟真性.为实现豆血红蛋白在食品级微生物中的异源表达,将携带豆血红蛋白LBC2基因的质粒PESC-TRP转入酿酒酵母CEN.PK2-1C中,通过添加kozak序列促进其翻译,并进一步对启动子序列进行选择,以提高豆血红蛋白表达量.对重组菌株进行发酵,用Western blot分析LegH蛋白表达水平.结果显示,诱导型启动子GAL1,10较三种组成型启动子TEF1、ADH1、GAP在表达LegH能力上具有显著优势,较产量最低的ADH1启动子提升了 3.93倍.在组成型启动子中,TEF1启动子能力较优,是ADH1启动子的 2.91倍,是GAP启动子的1.2倍.最后,利用Ni柱亲和层析对蛋白进行浓缩纯化,测得LegH发酵浓度为 2.79 mg/L.本研究成功实现了豆血红蛋白在酿酒酵母中的异源表达,经后续优化有可能成为豆血红蛋白异源表达的又一途径.
ISSN:1002-0306
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2022120029