杂合抗菌肽NK-LPd的设计、表达及抑菌活性评价

Q789; 目的:了解杂合抗菌肽NK-LPd的抑菌活性,探讨进一步开发潜力.方法:用两个甘氨酸作接头连接NK-lysin和Piscidin的活性片段,生物信息学技术预测杂合抗菌肽的理化性质和功能结构,根据毕赤酵母(Pichia pastoris)的密码子偏好性优化杂合抗菌肽NK-LPd基因序列,重叠延伸聚合酶链式反应(gene splicing by overlap extension polymerase chain reaction,SOE-PCR)扩增基因并与分泌型表达载体pPIC9K连接,通过化学法将其转化至毕赤酵母KM71感受态细胞中,经 0.5%甲醇诱导表达和亲和纯化后获得杂合抗菌...

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Published in食品工业科技 Vol. 44; no. 18; pp. 173 - 180
Main Authors 刘子琦, 刘正宇, 郭银虹, 王鸿飞, 姚波
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 重庆科技学院化学化工学院,重庆 401331%重庆科技学院化学化工学院,重庆 401331 01.09.2023
工业发酵微生物重庆市重点实验室,重庆 401331
Subjects
NK-LPd
设计
expression
抑菌活性评价
表达
design
hybrid peptide
evaluation of bacteriostatic activity
杂合抗菌肽
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ISSN1002-0306
DOI10.13386/j.issn1002-0306.2022100277

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Summary:Q789; 目的:了解杂合抗菌肽NK-LPd的抑菌活性,探讨进一步开发潜力.方法:用两个甘氨酸作接头连接NK-lysin和Piscidin的活性片段,生物信息学技术预测杂合抗菌肽的理化性质和功能结构,根据毕赤酵母(Pichia pastoris)的密码子偏好性优化杂合抗菌肽NK-LPd基因序列,重叠延伸聚合酶链式反应(gene splicing by overlap extension polymerase chain reaction,SOE-PCR)扩增基因并与分泌型表达载体pPIC9K连接,通过化学法将其转化至毕赤酵母KM71感受态细胞中,经 0.5%甲醇诱导表达和亲和纯化后获得杂合抗菌肽NK-LPd,评价其抗菌活性.结果:成功构建了KM71/pPIC9K-NK-LPd,经诱导表达 5 d后上清液中获得了相对分子质量约 6 kDa的表达产物,与预期大小相符;抗菌活性实验表明,NK-LPd对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有较强的抑菌活性,与母体肽相比,杂合抗菌肽NK-LPd的抑菌活性显著增强.结论:设计并在毕赤酵母KM71中分泌表达了杂合抗菌肽NK-LPd,其抑菌活性优于母体肽.本研究可为新型杂合抗菌肽的设计和生产提供技术参考.
ISSN:1002-0306
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2022100277