纤细薯蓣皂苷诱导肺癌A549细胞自噬的作用及机制 - 李燕; 李亚梅; 雷歌燕; 康佳兰; 刘明轩; 张敏鸿; 杨建琼 (中国药房, 2024)
R965%R285; 目的 探讨吉祥草中纤细薯蓣皂苷(gracillin)诱导人非小细胞肺癌A549细胞自噬的作用及机制.方法 以A549细胞为对象,采用CCK-8法检测不同浓度(0.25、0.5、1、2、4 μmol/L)gracillin作用不同时间(12、24、48 h)对细胞增殖的影响.与不加药物的对照组进行比较,采用生物透射电子显微镜观察gracillin(2 μmol/L)作用24 h对细胞自噬小体形成的影响;通过GFP-LC3质粒转染实验检测gracillin(0.25、0.5、1、2 μmol/L)作用24 h后GFP-LC3在细胞自噬小体膜上的聚集情况;采用实时定量聚合酶链式反应法和Western blot法检测gracillin(0.25、0.5、1、2 μmol/L)作用24 h后A549细胞中序列相似性家族102成员A(FAM102A)mRNA和蛋白的表达水平,以及自噬相关蛋白[p62、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)]和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(又名Akt)信号通路相关蛋白的表达水平.结果 gracillin对A549细胞具有一定的增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖趋势;其作用24 h的半数抑制浓度为2.55 μmol/L.gracillin作用24 h后,细胞胞浆内可见含双层膜结构的自噬小体;自噬小体膜上可见明显的GFP-LC3绿色荧光斑点,且有随药物浓度升高而增多的趋势.与对照组比较,gracillin不同浓度组细胞中FAM102A mRNA和蛋白的表达水平(0.5、1、2 μmol/L组)、Beclin-1蛋白的表达水平(1、2 μmol/L组)和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值(2 μmol/L组)均显著升高,p62蛋白的表达水平(1、2 μmol/L组)和Akt蛋白(1、2 μmol/L组)、PI3K蛋白(2 μmol/L组)的磷酸化水平均显著降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 gracillin可能通过上调FAM102A mRNA和蛋白的表达、抑制PI3K/Akt信号通路来促进A549细胞发生自噬,从而发挥抑制细胞增殖的作用.