血小板フェレーシスの残余単核細胞を用いたTCGFの産生と部分精製

ヒトT cell growth factor(TCGF1))は, 機能を有したT cellの培養, Malignant T cellの培養, Immunopotentiatorとして, NK細胞やkiller T cellの活性化等に有用なリンホカインである. TCGFの産生方法は, 近年, T cell hybridomaやTCGF産生T cell 1eukemia cell lineを用いた方法, 並びに, 遺伝子操作による方法が開発されている. 又, 末梢血単核細胞(PBM)を用いたconventionalな産生においても, 産生条件が種々検討されている. 今回, 我々は, 種々の機能を...

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Published in日本輸血学会雑誌 Vol. 29; no. 6; pp. 687 - 689
Main Authors 久保美子, 楠洋一郎, 谷広ミサエ, 神田朝子, 岡田浩佑, 坪倉篤雄
Format Journal Article
LanguageJapanese
Published 日本輸血学会 1984
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Abstract ヒトT cell growth factor(TCGF1))は, 機能を有したT cellの培養, Malignant T cellの培養, Immunopotentiatorとして, NK細胞やkiller T cellの活性化等に有用なリンホカインである. TCGFの産生方法は, 近年, T cell hybridomaやTCGF産生T cell 1eukemia cell lineを用いた方法, 並びに, 遺伝子操作による方法が開発されている. 又, 末梢血単核細胞(PBM)を用いたconventionalな産生においても, 産生条件が種々検討されている. 今回, 我々は, 種々の機能を有したT cellを培養し, その性状と機能の検討にTCGFを利用するため, 凍結保存した血小板フェレーシス残余PBMを用い, serum freeの条件下, TCGFの大量産生と, その部分精製を試みた. 〔材料及び方法〕TCGF産生:健康供血者から, Haemonetics Model 30Sを用いて血小板フェレーシス後, 分離バッグを遠心機DPR-6000(IEC)で800rpm, 3分間遠沈し, 血小板輸血に不必要な成分から, Ficoll gradient法によりPBMを得た. PBMの凍結保存は, 10%DMSO, 20%FCSを含んだRPMI 1640中で, -80℃のフリーザーにて行なった. TCGF産生は, Oppenheimら2)3)の方法に従い, serum freeの条件下, 10^7 /mlの細胞濃度で, Con A 10μg/ml, Phorbol・12・myristate-13-acetate(PMA)5ng/ml, hydroxyurea 2mMを加え, 37℃48時間培養後, 上清をTCGF contained medium(CM)として得た.
AbstractList ヒトT cell growth factor(TCGF1))は, 機能を有したT cellの培養, Malignant T cellの培養, Immunopotentiatorとして, NK細胞やkiller T cellの活性化等に有用なリンホカインである. TCGFの産生方法は, 近年, T cell hybridomaやTCGF産生T cell 1eukemia cell lineを用いた方法, 並びに, 遺伝子操作による方法が開発されている. 又, 末梢血単核細胞(PBM)を用いたconventionalな産生においても, 産生条件が種々検討されている. 今回, 我々は, 種々の機能を有したT cellを培養し, その性状と機能の検討にTCGFを利用するため, 凍結保存した血小板フェレーシス残余PBMを用い, serum freeの条件下, TCGFの大量産生と, その部分精製を試みた. 〔材料及び方法〕TCGF産生:健康供血者から, Haemonetics Model 30Sを用いて血小板フェレーシス後, 分離バッグを遠心機DPR-6000(IEC)で800rpm, 3分間遠沈し, 血小板輸血に不必要な成分から, Ficoll gradient法によりPBMを得た. PBMの凍結保存は, 10%DMSO, 20%FCSを含んだRPMI 1640中で, -80℃のフリーザーにて行なった. TCGF産生は, Oppenheimら2)3)の方法に従い, serum freeの条件下, 10^7 /mlの細胞濃度で, Con A 10μg/ml, Phorbol・12・myristate-13-acetate(PMA)5ng/ml, hydroxyurea 2mMを加え, 37℃48時間培養後, 上清をTCGF contained medium(CM)として得た.
Author 楠洋一郎
谷広ミサエ
久保美子
神田朝子
岡田浩佑
坪倉篤雄
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