PCR法による水, 食肉および野菜中の大腸菌と大腸菌群の検出に関する検討
PCR法を水と食品の大腸菌および大腸菌群検査に適用するための検討を行った.PCR法では, 大腸菌のtransferase遺伝子 (wecF), β-galactosidase遺伝子 (lacZ) およびE.coli 16S rRNA遺伝子 (E.coli 16S rRNA) を標的としたプライマーを使用した.結果は次のようであった. 1) ヒトおよび食品由来大腸菌のwecF, lacZおよびE.coli 16S rRNA遺伝子保有率はそれぞれ12/12 (100%), 99/99 (100%), 99/99 (100%), 食品由来Klebsiella属, Citrobacter属などの大腸菌...
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| Published in | 日本食品微生物学会雑誌 Vol. 21; no. 3; pp. 187 - 192 |
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| Main Authors | , , , , , , |
| Format | Journal Article |
| Language | Japanese |
| Published |
日本食品微生物学会
15.10.2004
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| Online Access | Get full text |
| ISSN | 1340-8267 1882-5982 |
| DOI | 10.5803/jsfm.21.187 |
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| Abstract | PCR法を水と食品の大腸菌および大腸菌群検査に適用するための検討を行った.PCR法では, 大腸菌のtransferase遺伝子 (wecF), β-galactosidase遺伝子 (lacZ) およびE.coli 16S rRNA遺伝子 (E.coli 16S rRNA) を標的としたプライマーを使用した.結果は次のようであった. 1) ヒトおよび食品由来大腸菌のwecF, lacZおよびE.coli 16S rRNA遺伝子保有率はそれぞれ12/12 (100%), 99/99 (100%), 99/99 (100%), 食品由来Klebsiella属, Citrobacter属などの大腸菌群のwecF, lacZ E. coli16S rRNA遺伝子保有率はそれぞれ28/63 (44%), 70/177 (39%), 0/177 (0%) であった. 2) 食品69検体 (食肉23検体, 野菜46検体) のBGLB培養液からのwecF, lacZ E. coli 16S rRNA遺伝子検出率はそれぞれ, 73%, 65%, 37%であった.E. coli 16S rRNA遺伝子検出と大腸菌検出との間には, 統計的に有意な相関が認められた.しかしE.coli 16S rRNA遺伝子検出と大腸菌群検出との間に有意な相関は認められなかった.wecFあるいはlacZ遺伝子検出と大腸菌群検出との間にも, 有意な相関は認められなかった 3) 水道の原水など153検体の水の大腸菌汚染をコリラート培地を用いた特定酵素基質法で調べたところ, E.coli 16S rRNA遺伝子検出と大腸菌検出との間に有意な相関が認められた. 以上の結果から, E.coli 16S rRNA遺伝子を標的としたPCR法は, 水および食品中の大腸菌を迅速, かつ特異的に検出する目的に使用できることが示唆された. |
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| AbstractList | PCR法を水と食品の大腸菌および大腸菌群検査に適用するための検討を行った.PCR法では, 大腸菌のtransferase遺伝子 (wecF), β-galactosidase遺伝子 (lacZ) およびE.coli 16S rRNA遺伝子 (E.coli 16S rRNA) を標的としたプライマーを使用した.結果は次のようであった. 1) ヒトおよび食品由来大腸菌のwecF, lacZおよびE.coli 16S rRNA遺伝子保有率はそれぞれ12/12 (100%), 99/99 (100%), 99/99 (100%), 食品由来Klebsiella属, Citrobacter属などの大腸菌群のwecF, lacZ E. coli16S rRNA遺伝子保有率はそれぞれ28/63 (44%), 70/177 (39%), 0/177 (0%) であった. 2) 食品69検体 (食肉23検体, 野菜46検体) のBGLB培養液からのwecF, lacZ E. coli 16S rRNA遺伝子検出率はそれぞれ, 73%, 65%, 37%であった.E. coli 16S rRNA遺伝子検出と大腸菌検出との間には, 統計的に有意な相関が認められた.しかしE.coli 16S rRNA遺伝子検出と大腸菌群検出との間に有意な相関は認められなかった.wecFあるいはlacZ遺伝子検出と大腸菌群検出との間にも, 有意な相関は認められなかった 3) 水道の原水など153検体の水の大腸菌汚染をコリラート培地を用いた特定酵素基質法で調べたところ, E.coli 16S rRNA遺伝子検出と大腸菌検出との間に有意な相関が認められた. 以上の結果から, E.coli 16S rRNA遺伝子を標的としたPCR法は, 水および食品中の大腸菌を迅速, かつ特異的に検出する目的に使用できることが示唆された. 「要約」PCR法を水と食品の大腸菌および大腸菌群検査に適用するための検討を行った. PCR法では, 大腸菌のtransferase遺伝子(wecF), β-galactosidase遺伝子(lacZ)およびE. coli 16S rRNA遺伝子(E. coli 16S rRNA)を標的としたプライマーを使用した. 結果は次のようであった. 1)ヒトおよび食品由来大腸菌のwecF, lacZおよびE. coli 16S rRNA遺伝子保有率はそれぞれ12/12(100%), 99/99(100%), 99/99(100%), 食品由来Klebsiella属, Citrobacter属などの大腸菌群のwecF, lacZ E. coli 16S rRNA遺伝子保有率はそれぞれ28/63(44%), 70/177(39%), 0/177(0%)であった. 2)食品69検体(食肉23検体, 野菜46検体)のBGLB培養液からのwecF, lacZ E. coli 16S rRNA遺伝子検出率はそれぞれ, 73%, 65%, 37%であった. E. coli 16S rRNA遺伝子検出と大腸菌検出との間には, 統計的に有意な相関が認められた. しかしE. coli 16S rRNA遺伝子検出と大腸菌群検出との間に有意な相関は認められなかった. wecFあるいはlacZ遺伝子検出と大腸菌群検出との間にも, 有意な相関は認められなかった. 3)水道の原水など153検体の水の大腸菌汚染をコリラート培地を用いた特定酵素基質法で調べたところ, E. coli 16S rRNA遺伝子検出と大腸菌検出との間に有意な相関が認められた. 以上の結果から, E. coli 16S rRNA遺伝子を標的としたPCR法は, 水および食品中の大腸菌を迅速, かつ特異的に検出する目的に使用できることが示唆された. |
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| References | 7) Chang, G. W., Brill, J. and Llum, R.: Proportion of β-D-glucronidase-negative Escherichia colf in human fecal samples. Appl. Environ. Microbiol., 55,335-339 (1989). 6) Bej, A. K., Steffan, R. J., Dicesare, J., Haff, L. and Atlas, R. M.: Detection of coliform bacteria in water by polymerase chain reaction and gene probes. Appl. Environ. Microbiol., 56,307-314 (1990). 2) 安藤正典ほか: 微生物試験. 上水試験方法, 水質試験方法等調査専門委員会編, p. 605- 627, 日本水道協会, 東京 (2001). 1) 粟飯原景昭ほか: 汚染指標菌. 食品衛生検査指針 (1). 内山充編, p. 67-90, 食品衛生協会, 東京 (1978). 4) Bayardelle, P. and Zafarullah, M.: Development of oligonucleotide primers for the specific PCR-based detection of the most frequent Enterobacteriaceae species DNA using wec gene templates. Can. J. Microbiol., 48,113-122 (2002). 9) 刑部陽宅, 香取幸治, 田中大祐, 磯部順子, 木全恵子, 永井美之: 食肉, 野菜および環境に分布する大腸菌群の分離と同定. 日食微誌, 20,197-202 (2004). 3) Baudisova, D.: Evaluation of Escherichia coli as the main indicator of faecal pollution. Water. Sci. Technol., 35,333-336 (1997). 8) Fricker, E. J. and Fricker, C.R.: Application of the polymerase chain reaction to the identification of Escherichia coli and coliforms in water. Letters in Applied Microbiology, 19, 44-46 (1994). 10) Sabat, G., Rose, P., Hickey, W. J. and Harkin, J. M.: Selective and sensitive method for PCR amplication of Escherichia coli 16S rRNA genes in soil. Appl. Environ. Microbiol., 66,844-849 (2000). 5) Beji, A. K., McCarty, S. C. and Atlas, R. M.: Detection of coliform bacteria and Escherichia coli by multiplex polymerase chain reaction: Comparison with defined substrate and plating methods for water quality monitoring. Appl. Environ. Microbiol., 57, 2429-2432 (1991). 11) Venkateswaran, K., Murakoshi, A. and Satake, M.: Comparison of commercially available kits with standard methods for detection of coliforms and Escherichia coli in food. Appl. Environ. Microbiol., 62, 2236-2243 (1996). |
| References_xml | – reference: 6) Bej, A. K., Steffan, R. J., Dicesare, J., Haff, L. and Atlas, R. M.: Detection of coliform bacteria in water by polymerase chain reaction and gene probes. Appl. Environ. Microbiol., 56,307-314 (1990). – reference: 2) 安藤正典ほか: 微生物試験. 上水試験方法, 水質試験方法等調査専門委員会編, p. 605- 627, 日本水道協会, 東京 (2001). – reference: 4) Bayardelle, P. and Zafarullah, M.: Development of oligonucleotide primers for the specific PCR-based detection of the most frequent Enterobacteriaceae species DNA using wec gene templates. Can. J. Microbiol., 48,113-122 (2002). – reference: 8) Fricker, E. J. and Fricker, C.R.: Application of the polymerase chain reaction to the identification of Escherichia coli and coliforms in water. Letters in Applied Microbiology, 19, 44-46 (1994). – reference: 3) Baudisova, D.: Evaluation of Escherichia coli as the main indicator of faecal pollution. Water. Sci. Technol., 35,333-336 (1997). – reference: 1) 粟飯原景昭ほか: 汚染指標菌. 食品衛生検査指針 (1). 内山充編, p. 67-90, 食品衛生協会, 東京 (1978). – reference: 11) Venkateswaran, K., Murakoshi, A. and Satake, M.: Comparison of commercially available kits with standard methods for detection of coliforms and Escherichia coli in food. Appl. Environ. Microbiol., 62, 2236-2243 (1996). – reference: 9) 刑部陽宅, 香取幸治, 田中大祐, 磯部順子, 木全恵子, 永井美之: 食肉, 野菜および環境に分布する大腸菌群の分離と同定. 日食微誌, 20,197-202 (2004). – reference: 5) Beji, A. K., McCarty, S. C. and Atlas, R. M.: Detection of coliform bacteria and Escherichia coli by multiplex polymerase chain reaction: Comparison with defined substrate and plating methods for water quality monitoring. Appl. Environ. Microbiol., 57, 2429-2432 (1991). – reference: 7) Chang, G. W., Brill, J. and Llum, R.: Proportion of β-D-glucronidase-negative Escherichia colf in human fecal samples. Appl. Environ. Microbiol., 55,335-339 (1989). – reference: 10) Sabat, G., Rose, P., Hickey, W. J. and Harkin, J. M.: Selective and sensitive method for PCR amplication of Escherichia coli 16S rRNA genes in soil. Appl. Environ. Microbiol., 66,844-849 (2000). |
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| Title | PCR法による水, 食肉および野菜中の大腸菌と大腸菌群の検出に関する検討 |
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