微小RNA-23靶向线粒体分裂蛋白1调控炎症反应和氧化应激保护脓毒症肾小管上皮细胞损伤 - 张利; 葛亮; 马小力; 马菁菁; 张阳; 孙林春 (Linchuang Shenzangbing Zazhi, 2024)
目的 探讨微小RNA-23(microRNA-23,miR-23)和线粒体分裂蛋白 1(fission protein 1,FIS1)在脓毒症肾小管上皮细胞中的作用关系以及miR-23靶向FIS1对细胞炎症反应和氧化应激的调控.方法 体外培养人肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2),用脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)诱导建立脓毒症模型;利用双荧光素酶报告基因验证miR-23和FIS1的相互作用.将HK-2细胞采用随机数字表法随机分组,用miR-23的模拟物/抑制物和FIS1的真核表达载体/小干扰RNA单独或联合处理,细胞计数试剂检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒检测细胞MDA水平,酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)1β、IL-6和IL-10水平.结果 LPS诱导的HK-2细胞miR-23 mRNA表达量为对照组的(0.60±0.12)倍(P＜0.05),FIS1 mRNA表达量为对照组的(2.16±0.21)倍(P＜0.05),FISI蛋白表达水平是对照组的(2.69±0.28)倍(P＜0.05).miR-23可以与FIS1的 3'-UTR区形成互补结合,负向调控FIS1.miR-23 mimic组的 TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.021±0.003)、(0.0310±0.007)和(0.017±0.006)ng/ml,FIS1 siRNA组的TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.015±0.004)、(0.043±0.007)和(0.020±0.008)ng/ml,均低于空白对照组(P＜0.05),两组的IL-10分别为(0.325±0.011)和(0.376±0.018)ng/ml,高于空白对照组(P＜0.05).miR-23 inhibitor组的 TNF-α和 IL-6分别为(0.117±0.015)和(0.096±0.007)ng/ml,pcD-NA3.1-FIS1组TNF-α和IL-6分别为(0.168±0.024)和(0.147±0.030)ng/ml,均高于空白对照组(P均＜0.05),miR-23 inhi