β-淀粉样蛋白对叉头蛋白O3a和突触后致密蛋白95的影响

• Published in: Zhongshan da xue xue bao. Zhongshan daxue xuebao yixue kexue ban = Journal of Sun Yat-sen University. Yi xue ke xue ban Vol. 42; no. 5; pp. 676 - 685
• Main Authors: 牛波, 王欣怡, 徐江平, 汪海涛
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 南方医科大学药学院神经药理学科,广东广州510515 01.09.2021; Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
• Subjects: β-淀粉样蛋白; 叉头框蛋白O3a; 突触后致密蛋白95; 老年性痴呆; 蛋白激酶B; β-淀粉样蛋白;叉头框蛋白O3a;突触后致密蛋白95;蛋白激酶B;老年性痴呆
• ISSN: 1672-3554
• DOI: 10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2021.0

R741.02; [目的]为了研究β-淀粉样蛋白(Aβ)产生神经毒性的机制,本研究探讨了Aβ对凋亡相关核转录因子叉头蛋白O3a(FoxO3a)和突触后致密蛋白95(PSD95)的作用及可能的机制.[方法]采用梯度浓度(5、10、20μmol/L)寡聚化的Aβ25-35处理PC12细胞和神经元24 h,采用Western blot法检测FoxO3a和PSD95的变化.免疫荧光法检测PC12细胞中PSD95表达量的变化和FoxO3a在细胞内的定位.在Aβ25-35海马注射的大鼠和APP/PS1转基因鼠中,考察脑组织中PSD95和FoxO3a的变化.采用Western Blot法检测体外环境和在体环境中,Aβ对FoxO3a和蛋白激酶B(AKT)磷酸化的影响.[结果]与正常对照组相比,20μmol/L的Aβ25-35处理组PSD95蛋白水平下调至(45.09±1.61)％(F=7.487,P=0.0540).与之对应,20μmol/L的Aβ25-35上调FoxO3a的蛋白水平为对照组的(228.7±20.44)％(F=17.48,P=0.0210).在原代培养的神经元中,获得了相似的结果.另外,免疫荧光的结果显示Aβ25-35可以促进FoxO3a进入细胞核.大鼠海马注射Aβ25-35后,水迷宫实验中目标区域的平均停留时间为(24.35±1.29)s(F=2.843,P=0.098),平均穿越次数为(2.53±0.49)次(F=3.459,P=0.0149),与对照组相比都显著降低.RT-PCR结果显示Aβ25-35组大鼠海马组织中PSD95的mRNA水平下降为对照组的(58.40±8.28)％(F=1.193,P=0.0101),同时FoxO3a的mRNA的表达量上调(140.90±7.45)％(F=2.378,P=0.0496).在7月龄的APP/PS1转基因小鼠的大脑组织中,PSD95的mRNA和蛋白水平分别下调为野生型小鼠的(60.89±1.53)％(F=20.05,P=0.0088)和(59.63±13.55)％(F=8.496,P=0.0445),而FoxO3a的mRNA和蛋白水平则分别上调为对照组的(172.4±4.87)％(F=2.351,P=0.0004)和(235.00±39.03)％(F=2.754,P=0.0320).20μmol/L的Aβ25-35处理PC12细胞不同时间后(5、10、20和40