肌球蛋白重链7基因来源的miR-208b-3p促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达

• Published in: Zhongshan da xue xue bao. Zhongshan daxue xuebao yixue kexue ban = Journal of Sun Yat-sen University. Yi xue ke xue ban Vol. 44; no. 4; pp. 642 - 650
• Main Authors: 张梦珍, 翟琳, 郭林林, 朱杰宁, 李晖, 徐金东, 方咸宏, 单志新
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 南方医科大学附属广东省人民医院//广东省医学科学院医学研究部, 广东广州 510080%南方医科大学附属广东省人民医院//广东省医学科学院检验科,广东广州 510080%南方医科大学附属广东省人民医院//广东省医学科学院麻醉科,广东广州 510080 01.07.2023; Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
• Subjects: miR-208b-3p; 微小RNA; 心肌成纤维细胞; 心肌纤维化; miR-208b-3p; 心肌纤维化; 微小RNA; 心肌成纤维细胞
• ISSN: 1672-3554
• DOI: 10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).202304

R363.2; [目的]探究肌球蛋白重链7基因来源的微小RNA-208b-3p(miR-208b-3p)对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控作用.[方法]通过miRNA表达谱芯片分析18周龄的糖尿病db/db小鼠和db/m对照小鼠心肌中差异的miRNAs.通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-208b-3p在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和高糖/葡萄糖氧化酶(G/Go)处理的C57BL/6乳小鼠心肌细胞(NMVCs)和心肌成纤维细胞(mCFs)中的表达;利用CCK8细胞增殖实验、流式细胞术和纤维化相关蛋白(包括COL1A1、COL3A1和α-SMA)表达检测来了解miR-208b-3p对mCFs纤维化表型的影响;双萤光素酶报告基因实验检测miR-208b-3p与潜在靶基因Mtf2和Pgrmc13′端非翻译区(3′-UTR)的结合作用;利用RT-qPCR和Western blot法分别检测miR-208b-3p转染的mCFs中Mtf2和Pgrmc1表达;通过小干扰RNA(siRNA)抑制Mtf2和Pgrmc1表达,并检测对mCFs中纤维化相关蛋白表达的作用.[结果]miRNA表达谱和RT-qPCR结果证实miR-208b-3p在糖尿病db/db小鼠心肌中表达显著升高.miR-208b-3p前体与宿主基因Myh7在db/db小鼠心肌中表达显著升高,miR-208b-3p与Myh7 mRNA在乳小鼠来源的mCFs和NMVCs中均有表达,但在NMVCs中水平更高.miR-208b-3p在AngⅡ和G/Go处理后的mCFs和NMVCs中表达均明显升高.miR-208b-3p可显著增加mCFs中纤维化相关蛋白COL1A1、COL3A1和α-SMA表达,但不影响mCFs的增殖能力和细胞周期分布特征.双萤光素酶报告基因实验显示miR-208b-3p与Mtf2和Pgrmc13′-UTR有结合作用.miR-208b-3p可在转录后水平抑制mCFs中Mtf2和Pgrmc1表达.miR-208b-3p、Mtf2 siRNA和Pgrmc1 siRNA均能一致性地促进mCFs中纤维化相关蛋白表达.[结论]miR-208b-3p通过靶向Mtf2和Pgrmc1基因发挥促进mCFs中纤维化相关基因表达的作用.