玉米内州萎蔫病菌的巢式PCR检测方法

• Published in: 食品安全质量检测学报 no. 12; pp. 3933 - 3938
• Main Author: 封立平 余冬冬 王英超 吴翠萍 吴兴海 张京宣 王简 宋涛
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心,青岛,266002%黄岛出入境检验检疫局,青岛,266002%江苏出入境检验检疫局,南京,210001 2014
• Subjects: Nested-PCR; 检测; 玉米内州萎蔫病菌; nested-PCR; detection; 玉米内州萎蔫病菌; 检测; Nested- PCR; Clavibacter michiganensis subsp.nebraskensis
• ISSN: 2095-0381

目的建立了一种特异、敏感、快速的玉米内州萎蔫病菌的巢式PCR(Nest-PCR)检测方法。方法根据玉米内州萎蔫病菌(Clavibacter michiganensis subsp.Nebraskensis,Cmn)和C.michganensis种下其他4个亚种细菌Cmm、Cmi、Cms、Cmt的ITS序列差异性基因位点设计Cmn FP-OUTER/Cmn RP-OUTER为外侧引物,Cmn FP-INNER/Cmn RP-INNER为内侧引物的巢式-PCR,并对所有参试菌株DNA和菌悬液进行了扩增。结果经过两轮扩增,能从参试的玉米内州萎蔫病菌中特异性地扩增出1条122 bp的片段,而其他参试菌株没有扩增信号。该巢式PCR检测方法对菌悬液的最低检测限为3.54×102 CFU/m L,检测灵敏度比常规PCR提高了1000倍。结论本研究建立的玉米内州萎蔫病菌的巢式PCR(nest-PCR)检测方法具有良好的特异性和灵敏性,将会在玉米内州萎蔫病的早期诊断及预防传入方面发挥重要作用。