新型EGFP标记的杆状病毒转移载体的构建及EGFP的制备 - 杨军 王一理 司履生 (Xi'an jiao tong da xue xue bao. Journal of Xi'an Jiaotong University (medical sciences). Yi xue ban, 2006)
目的构建可表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合蛋白的昆虫杆状病毒转移载体，利用Sf-9细胞表达、制备EGFP。方法用PCR法从pEGFP质粒中扩增EGFP基因，NcoⅠ／SalⅠ双酶切，克隆入杆状病毒转移载体Nco-Ⅰ／SalⅠ酶切位点之间，获得pFB-EGFP质粒；转化E．coli DH10Bac，通过转座子Tn7的介导，获得重组杆状病毒Ac-EGFP；感染Sf-9昆虫细胞；利用激光共聚焦显微镜和SDS-PAGE观察并检测EGFP的表达。非变性法纯化EGFP。结果荧光显微镜和激光共聚焦显微镜证实感染的Sf-9细胞可表达EGFP；通过SDS-PAGE获得的EGFP，大小为27ku。结论重组pFB-EGFP载体具备表达EGFP的能力，为分子生物学研究提供了一种新型可表达EGFP融合蛋白的昆虫杆状病毒表达载体。