人脐带间充质干细胞的分离培养及向成骨成脂分化的实验研究 - 孙国栋 李志忠 王晶 林永新 洪亮 吴波文 焦根龙 邵建立 (Xi'an jiao tong da xue xue bao. Journal of Xi'an Jiaotong University (medical sciences). Yi xue ban, 2010)
目的探讨并优化人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）体外获取及培养增殖的方法并鉴定;诱导其向成骨细胞和脂肪细胞分化,为其进一步应用奠定基础。方法用酶消化法分离培养hUCMSCs,通过传代培养、扩增,倒置光学显微镜及原子力显微镜下观察细胞形态;MTT法检测细胞增殖曲线,流式细胞仪检测免疫表型;体外向成骨、脂肪方向诱导分化,并通过特异性染色鉴定其分化能力。结果采用酶消化法能有效分离纯化hUCMSCs。接种24 h,贴壁细胞形态多为长梭型、多边形或成纤维细胞样形态,大小均一。P3、P7代细胞的生长曲线基本一致,增殖能力强。流式细胞仪分析,第3代细胞强烈表达CD29、CD44、CD105,不表达CD34、CD45和HLA-DR。经成骨诱导分化后4周,碱性磷酸酶染色呈强阳性,茜素红染色可见明显钙结节;经成脂诱导3周,油红O染色呈阳性,有明显的脂滴出现。结论本实验建立了一套体外稳定培养扩增hUCMSCs的方法。所培养的细胞成分单一、扩增迅速、生物学形状稳定,并能使其在体外诱导向成骨细胞和脂肪细胞分化,有望成为组织工程较为理想的种子细胞。