人U6启动子表达载体的构建及在胃癌细胞中的活性鉴定 - 张鹏宇 于杰 谭武红 赵璇 (Xi'an jiao tong da xue xue bao. Journal of Xi'an Jiaotong University (medical sciences). Yi xue ban, 2006)
目的构建人U6（hU6）snRNA启动子驱动的小RNA分子的表达载体，并在人胃低分化腺癌SGC-7901细胞中鉴定其表达外源性小RNA分子的活性。方法以人基因组DNA为模板，用PCR方法扩增hU6 snRNA启动子序列，并将其克隆入PUC19载体中，命名为PUC-h U6—extra，经测序证明其序列的正确性；用脂质体法转染SGC-7901细胞；用RT—PCR检测U6启动子的转录活性，并测定培养细胞的生长曲线。结果hU6 snRNA基因启动子和紧接转录起始点hU6 snRNA的前27个核苷酸被成功地克隆入PUC19质粒载体，重组载体在SGC-7901细胞中能高表达小分子RNA，并且未观察到后者对细胞体外增殖的影响。结论成功构建了以hU6 snRNA启动子驱动的、能在人胃低分化腺癌SGC-7901细胞内高效转录小分子RNA的表达质粒PUC-hU6-extra。