油桐ISSR-PCR最佳反应体系的建立

• Published in: Forest research (Beijing) Vol. 21; no. 2; pp. 194 - 199
• Main Author: 李鹏 汪阳东 陈益存 张小平
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 安徽师范大学生命科学学院,安徽,芜湖,241000 2008; 中国林业科学研究院亚热带林业研究所,浙江,富阳,311400%中国林业科学研究院亚热带林业研究所,浙江,富阳,311400%安徽师范大学生命科学学院,安徽,芜湖,241000
• Subjects: ISSR-PCR; 单因子试验; 正交设计; 油桐; 油桐; ISSR-PCR; 正交设计; 单因子试验
• ISSN: 1001-1498
• DOI: 10.3321/j.issn:1001-1498.2008.02.011

在油桐遗传多样性研究中,为了获得清晰可靠、重复性强的ISSR扩增结果,综合采用单因子试验和正交设计两种方法对影响油桐ISSR-PCR反应结果的4个因素(Taq酶、Mg2+、dNTP、引物)进行优化试验。单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反应的影响,找出最佳反应水平。正交设计选用L9(34)方案,采用直观分析获得影响因素最佳反应水平。通过综合比较分析,最终建立了油桐ISSR-PCR反应的最佳反应体系,即在20μL反应体系中,Taq DNA聚合酶1.0 U,Mg2+2.0 mmol.L-1,dNTP 0.20 mmol.L-1,引物0.4μmol.L-1,1×PCR缓冲液,40 ng模板DNA。