南极磷虾羧肽酶A的分离纯化及其酶学性质分析 - 吴晶;周德庆;王珊珊;苏婷;朱兰兰 (南方农业学报, 2017)
【目的】建立南极磷虾羧肽酶A的分离纯化方法，并研究分析其酶学性质，为南极磷虾羧肽酶A的开发及应用打下基础。【方法】南极磷虾粗酶液经硫酸铵分级沉淀、HiTrapDEAEFF阴离子交换柱层析和SEC70凝胶过滤柱层析，纯化得到的羧肽酶A，以SDS-PAGE分析其分子量；通过分析酶系反应温度、pH、金属离子、抑制剂对南极磷虾羧肽酶A活力的影响，明确其酶学性质和酶促动力学。【结果】南极磷虾羧肽酶A分子量为75.0kD，其最适温度30℃，最适pH8.0。Mg2+、Zn2+、Mn2+和Ni2+对南极磷虾羧肽酶A有显著的激活作用（P<0.05，下同），且金属离子浓度越高，激活效果越明显；Ca2+、Fe3+、Cu2+和Hg2+对南极磷虾羧肽酶A存在不同程度的抑制作用，以Hg2+的抑制作用最强，Fe3+的抑制作用最弱。金属蛋白酶抑制剂乙二胺四乙酸（EDTA）、3-苯基丙酸（3-phenylpropionicacid）和1,10-菲罗啉（1,10-phenathroline）对南极磷虾羧肽酶A活力有显著的抑制作用，且抑制剂浓度越高，抑制效果越明显。【结论】南极磷虾羧肽酶A具有金属蛋白酶特性，可开发成降解酶制剂在食品工业及医药行业中推广应用。