荸荠基因组DNA的提取及RAPD反应体系的建立

• Published in: Guangxi nong ye ke xue Vol. 40; no. 3; pp. 229 - 232
• Main Author: 江文 陈丽娟 李杨瑞 杨丽涛
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 广西农业科学院生物技术研究所,南宁,530007 2009; 广西农业科学院广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室,南宁,530007%广西农业科学院生物技术研究所,南宁,530007%广西大学农学院,南宁,530005; 广西农业科学院广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室,南宁,530007%广西大学农学院,南宁,530005; 广西大学农学院,南宁,530005
• Subjects: RAPD; 反应体系; 基因组DNA; 提取; 荸荠; RAPD; 荸荠; reaction system; 提取; 反应体系; genomie DNA; extraction; 基因组DNA; water chestnut (Eleocharis tuberose Roem et Schuh)
• ISSN: 1002-8161
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2009.03.003

以荸荠叶状茎为试验材料，采用改良的SDS法提取其基因组DNA，并对其RAPD反应体系进行优化，建立了荸荠的RAPD—PCR优化反应体系和程序。结果表明，提取的基因组DNA纯度和完整性较好，OD260/OD280值在1．8～2．0之间，DNA无降解现象，完全可以满足RAPD—PCR扩增要求。建立了荸荠RAPD反应体系：总体积为25μl，各有关成分的最佳浓度分别为25mmol／L Mg^2＋，1．0UTaqDNA聚合酶，0．2mmol／L dNTPs，1μmol／μl引物，1．5ng／μl DNA模板。PCR反应程序为：94％预变性3min；94℃变性1min，37℃退火30s，72℃延伸60s，40个循环；最后72％延伸10min。