解淀粉芽孢杆菌pyrR基因敲除载体的构建

• Published in: 南方农业学报 Vol. 46; no. 8; pp. 1339 - 1344
• Main Author: 吴庆 刘慧燕 方海田 何建国 贺晓光 王梦娇 于丽男
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 宁夏大学农学院,银川,750021 2015
• Subjects: pyrR基因; 基因敲除; 温敏型敲除载体; 胞苷; 解淀粉芽孢杆菌; pyrR基因; 基因敲除; cytidine; 胞苷; B.amyloliquefaciens; pyrR gene; temperature sensitive knock-out vector; 解淀粉芽孢杆菌; gene knock-out; 温敏型敲除载体

【目的】构建用于解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）pyrR基因敲除的温敏型敲除载体,为研究pyrR蛋白缺失对胞苷合成的影响奠定基础。【方法】设计并合成含有限制性内切酶酶切位点的引物,以解淀粉芽孢杆菌基因组DNA为模板,利用PCR分别扩增pyrR基因的上游同源序列和下游同源序列,再定向克隆至含卡那抗性基因的p KS1温敏型载体上,构建敲除载体p KS1-pyrR。【结果】经特异性引物对pyrR-S1/pyrR-A1和pyrR-S2/pyrR-A2扩增,获得解淀粉芽孢杆菌目的DNA片段pyrR-up和pyrR-down,大小约500 bp;目的片段经克隆载体p...