吖啶橙荧光染色法在循环肿瘤细胞筛查中的应用 - 刘敏 马富玲 韩荣 李美 刘淑芬 张淑敏 (天津医药, 2015)
目的应用吖啶橙荧光（AO-F）染色法搭建循环肿瘤细胞（CTCs）筛选平台,并将其应用于肾癌患者外周血CTCs筛查。方法选择转移性肾细胞癌患者27例（研究组）,用不同浓度的血清培养肾癌原代肿瘤细胞和细胞系769-P,分别制备涂片于荧光显微镜下,观察细胞形态及着色情况是否一致;随机计数5个视野下AO-F阳性（＋）细胞占769-P细胞的比例,评估AO-F染料对肿瘤细胞的敏感性;清晨抽取10例健康体检者（对照组）空腹外周血,红细胞裂解后富集单个核细胞,配制含1×106个细胞的悬液;取对数生长期肾肿瘤细胞,配制成每管分别含500、200、100、50、10个肿瘤细胞的悬液,与1×106个单个核细胞混合,建立肾癌外周血CTCs模型,AO-F染色后计算肿瘤细胞回收率;另计算2组外周血AO-F＋细胞的检出率,分析其与患者临床参数之间的关系。结果肾癌原代肿瘤细胞和细胞系769-P均呈现出鲜明色彩,两者具有相似的形态学特征,平均每个视野下AO-F＋细胞占肿瘤细胞的比例为93%±3%。含500、200、100、50个细胞的悬液组肿瘤细胞回收率（%）分别为10.2±3.8、9.2±2.3、10.8±2.6、10.5±1.9,组间差异无统计学意义（P〉0.05）。含10个细胞的悬液组偶然可检测到AO-F＋细胞。对照组无一例阳性,研究组9例检测到AO-F＋细胞,检出率为33.33%;检出率在不同年龄、性别、肿瘤大小、病理类型、Furhman分级、转移部位及带瘤状态间差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 AO-F染色法筛查肾癌患者外周血CTCs切实可行,并具有高度的特异性和可重复性,对早期预测肾癌复发转移有一定参考价值。