合浦珠母贝矿化基因Pearlin重组蛋白的表达条件优化 - 毕晓敏 黄桂菊 范嗣刚 朱文杰 喻达辉 (南方水产科学, 2015)
为了获得稳定高表达的合浦珠母贝（Pinctada fucata）壳基质蛋白Pearlin基因的重组融合蛋白，该研究从合浦珠母贝外套膜总RNA中扩增得到Pearlin的cDNA，将其ORF克隆至原核表达载体pET32a构建得到重组质粒pET32a．Pearlin，并转化表达宿主菌大肠杆菌（E．coli）BL21（DE3），得到的原核重组融合蛋白pET32a—Pearlin约为34．19kD。对重组融合蛋白表达所需IPTG诱导浓度、培养温度、培养基pH及IPTG诱导时问、时机进行了优化。结果显示，IPTG浓度在0．6—1．4mmol·L^-1范围内诱导效果最佳；在IPTG终浓度为1mmol·L^-1、相同培养时间（6h）下，37℃表达蛋白最多；重组蛋白在pH分别为6．0、7．0、8．0的培养基中表达量变化不大；在IPTG诱导浓度一定的条件下，最佳诱导时间为4～6h；在IPTG诱导浓度和诱导时间一定的条件下，在转接3～4h后进行IPTG诱导蛋白表达量较理想。对重组融合蛋白pET32a·Peadin的可溶性进行检测，发现在不同的诱导条件下，融合蛋白都主要以包涵体形式存在。