靶向上皮特异性抗原阳性肝癌干细胞单克隆抗体联合顺铂治疗肝癌的实验研究

• Published in: 中华肿瘤杂志 Vol. 38; no. 5; pp. 333 - 339
• Main Author: 何永燕 遇珑 容雁 孙立新 孙力超 杨治华 冉宇靓 李力
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 广西医科大学医学科学实验中心, 南宁,530021%100021,国家癌症中心 中国医学科学院 北京协和医学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室%广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科, 南宁,530021 2016
• Subjects: 上皮特异性抗原; 单克隆; 抗体; 抗药性; 细胞系; 肝肿瘤; 肿瘤; 肿瘤干细胞; 顺铂; 抗体,单克隆; 抗药性,肿瘤; Antibodies,monoclonal; Epithelial specific antigen; Cisplatin; 肿瘤干细胞; 肝肿瘤; Subject words] Liver neoplasms; Drug resistance,neoplasm; 上皮特异性抗原; 细胞系,肿瘤; 顺铂; Cell line,tumor; Tumor stem cells
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3766.2016.05.003
• ISSN: 0253-3766

目的探讨靶向肝癌干细胞单克隆抗体的生物学特征及其联合顺铂治疗肝癌的疗效。方法采用无血清悬浮培养法和PKH26染色法确定肝癌Bel7402-V3细胞中存在肿瘤干细胞。细胞免疫荧光法检测单克隆抗体15D2识别的抗原蛋白与PKH26阳性细胞及上皮特异性抗原（ESA）在Bel7402-V3细胞中的表达情况。无血清悬浮培养法检测流式细胞术分选出的15D2阳性细胞的自我更新能力以及15D2对Bel7402．V3细胞自我更新能力的影响。CCK8法检测15D2对细胞顺铂耐药能力的影响。裸鼠体内治疗实验分析15D2联合顺铂对Bel7402．V3移植瘤生长的抑制作用。结果Bel7402-V3细胞无血清悬浮培养11d后形成的细胞球体中存在单个PKH26阳性细胞。细胞免疫荧光显示，单克隆抗体15D2识别的抗原分子能与PKH26和ESA在Bel7402-V3细胞上共定位。15D2阳性细胞和15D2阴性细胞的体外成球率分别为（30．4±3．4）％和（8．8±1．8）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。15D2阳性细胞具有更高的顺铂耐药性，15D2阳性细胞和15D2阴性细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为1．014和0．365μmol／L。单克隆抗体15D2能够显著抑制Bel7402．V3细胞的无血清成球，抑制率为37．5％。经15D2处理后的Bel7402-V3细胞，顺铂耐药能力明显下降，其Ic50为0．211μg／ml，而对照组的IC50为0．325μg／ml。抗体体内治疗实验结果显示，50、25、12．5mg／kg15D2组的肿瘤生长抑制率分别为82．6％、71．4％和60．0％，50mg／kg15D2＋顺铂组的肿瘤生长抑制率为91．0％，顺铂组的肿瘤生长抑制率为56．7％。结论单克隆抗体15D2是抗肝癌干细胞的功能性单克隆抗体，为肝癌干细胞靶向治疗的候选抗体药物。