Evidence for the Interaction between HrpT and HrcC of Pseudomonas syringae pv. syringae 61 - 林元春(Yuan-Chuen Lin); 徐世典(Shih-Tien Hsu); 黃秀珍(Hsiou-Chen Huang) (植物病理學會刊, 2006)
選殖自菜豆細菌性斑點病菌Psy61的hrp/hrc致病基因組至少可轉譯28個蛋白，其中多数的Hrc/Hrp蛋白在細菌内外膜上組成第二型分泌系杭。前人研究顯示，将hrp/hrc基因組之hrpT基因突變俊，Psy61菌株在煙草上引起過敏性反應的能力及harpin蛋白的累積分泌均受到抑制。爲了探討HrpT蛋白在整個分泌遇程中所可能扮演的角色，研究中構築一hrpT-FLAG基因並利用M2單株抗體偵测其所表现的融合蛋白。将hrpT-FLAG進一步次撰殖於諷刺廣寄土載體並送入hrpT基因突燮菌株俊，可恢復突燮菌株所喪失的引起遇敏性反應以及累積並分泌harpin蛋白的能力，此結果亦顯示HrpT蛋白之C端融合”FLAG”胜肽，並不影響其原有功能。利用細胞成份分離法及免疫法進行分析，得知HrpT-FLAG舆HrcC蛋白二者均分布於外膜部位；此外以酵母菌雙雜合系統(yeast two-hybrid system)及pull-down方法，可侦测到HrpT舆HrcC蛋白於生體內外均有相互結合的现象。依據過去研究顯示，HrcC蛋白就如其同源蛋白YscC、InvG、MxiD或PuID蛋白，以自體聚合方式制組成一個碟狀結構，構成第三型分泌胞器跨越外膜部位的基座，但這些外膜蛋白尚须依靠導引蛋白幫助才能穩定存在於外膜。不同的導引蛋白彼此間序列相似程度不高，但都是位於外膜的小分子脂蛋白。HrpT蛋白大小爲7.5kDa，其N端序列含18個疏水性氨基酸以及脂質結合部位，本研究證實HrpT蛋白位於體外膜且舆HrcC蛋白間有交互作用，因此推测HrpT極可能擔任HrcC的導引蛋白，進－步参與第三型分泌胞器的粗装。